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基于核酸分子学方法的肉类成分鉴别技术研究进展

为保证食物成分的真实性,质检“十二五”规划纲要明确指出,需要点加强展开食物掺假辨别技能研讨。在肉类掺假方式层出不穷的形式下,对动物源性成分辨别技能的研讨逐渐成为食物安全领域的研讨热门。目前,运用的动物物种辨别剖析办法首要依据蛋白质和DNA剖析。


惯例PCR-凝胶电泳法

DNA片段经扩增后,经过琼脂糖凝胶电泳进行片段巨细的检测,这是依据核酸分子学肉类成分辨别办法中应用广泛且操作最简单的技能。其根本的实验思路为:依据不同物种细胞核或线粒体基因组序列中的特征位点规划物种特异性引物,使用PCR反响完成食物中方针基因片段的指数级扩增,继而经过电泳辨别食物中可能的物种来历。


多重PCR-凝胶电泳法:

多重PCR是规划多种一般PCR的引物,加入同一PCR反响系统里,同时扩增出多个核酸片段,以同时检测多种不同动物源成分的一项具有发展前景的技能。比较于单一物种的PCR系统,多重PCR技能具有节约本钱,提高剖析速率、功率和牢靠性的优点。


PCR-RAPD法和PCR-RFLP法:

PCR-限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)法是将通用引物扩增后的PCR产品进行限制性内切酶酶切,然后经过凝胶电泳进行观察,作为单一物种的特有形式进行定性剖析,可进行亲缘性较近的物种间的辨别。

PCR-随机扩增多态性DNA(RAPD)使用任意PCR短的引物扩增产生一系列的产品,得到PCR产品的指纹图谱,依据指纹图间的不同区别不同的种属。当参考材料可用的很少或DNA序列信息未知时,RAPD技能是十分强壮的。但PCR-RAPD的重复性较差且受到食物中其他DNA成分的严峻搅扰,存在不易规范化与广泛应用的缺点。


DNA条形码:

DNA条形码技能开始用于生物分类和物种辨别,后发展到应用于动物肉类判定中并得到广泛研讨,是一种简单、快速、牢靠、有效的分子判定技能。大多数动物物种的DNA条形码是线粒体上一段约650 bp编码基因COI,研讨者将其作为动物判定的条形码规范片段。COI基因在双链环状闭合的核外线粒体基因组上,保证了其相对完整性和热稳定性,在深加工的肉类食物中有相对满足量的DNA被用于PCR扩增,保证满足高的PCR产品含量。COI序列还具有满足变异性、易扩增、片段自身在物种种内具有特异性和种间多样性等特点。


实时荧光定量PCR技能:

实时荧光定量PCR技能是使用荧光分子供给的荧光强度与PCR产品的丰度之间的相关性来完成实时数据收集。比较于在末期进行剖析的凝胶琼脂糖或聚丙烯酰胺电泳技能,实时荧光定量PCR办法自然更加精确活络。在复杂的混合而成的产品中,即使只要微量的不同物种成分,也能剖析出来,因此被认为是在肉类判定中最有前途的分子东西之一。


ddPCR技能:

微滴数字(dd)PCR技能作为一种全新的精确定量核酸检测办法,经过把反响系统均分到大量反响单元中独登时进行PCR,并依据泊松散布和阳性比例来计算核酸数量。与传统PCR、定量PCR比较,其结果的精确度、精确性和活络度更佳。定量结果不再依赖于Ct值,直接给出靶序列的开始浓度,完成真正意义上的肯定定量。